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PUREfrex®2.0無細(xì)胞蛋白合成試劑盒使用方法及組分介紹

更新時(shí)間:2025-04-28   點(diǎn)擊次數(shù):160次

PUREfrex®2.0于2015年推出,相比1.0的版本PUREfrex®2.0的蛋白產(chǎn)量有所提升。PUREfrex®2.0改進(jìn)了從大腸桿菌中純化的所有組分的制備方法,并優(yōu)化了因子的組成,實(shí)現(xiàn)了比PUREfrex 1.0高2-10倍的蛋白質(zhì)生產(chǎn)率。

圖2.png

圖2.PUREfrex® 1.0和PUREfrex® 2.0對比數(shù)據(jù)

 

PUREfrex®2.0使用方法(僅供參考,操作方法請查閱產(chǎn)品說明書):

以20ul反應(yīng)體系為例,如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對應(yīng)試劑。

1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解,然后在冰上冷卻。

2. 在冰上融化溶液II和溶液III。

3. 將溶液I,溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內(nèi)容物。

4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液,每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。

Water

7-X μL

Solution I

10μL

Solution II

1μL

Solution III

1μL

Template DNA

X μL

總體積

20ul

5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h,合成蛋白。

6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí),請用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。

 

試劑盒組分.png

試劑盒組分(各組分中具體成分信息保密):

組分名稱

組分內(nèi)容

保存溫度

Solution I

Amino acids,   NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.

-20℃

Solution II

Proteins in 30 %   glycerol buffer

-20℃/-80℃

Solution III

Ribosome (20 μM)

-80℃

DHFR DNA

PCR product   containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a   positive control. (20 ng/μL)

-20℃

請注意:1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。

 

產(chǎn)品信息

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

GFK-PF201-0.25-EX

 

PUREfrex®2.0

1 x 250 µl

GFK-PF201-2ML-EX

2ml

GFK-PF201-10ML-EX

5 x 2 ml

 

當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí),只需向PUREfrex®2.0中添加補(bǔ)充試劑即可。

 

分子伴侶-幫助蛋白正確折疊,合成可溶形式蛋白質(zhì)

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

GFK-PF003-0.5-EX

DnaK Mix

500 µl Equivalents

GFK-PF003-10ML-EX

DnaK Mix

5 x 2 ml Equivalents

GFK-PF004-0.5-EX

GroE Mix

500 µl Equivalents

GFK-PF004-10ML-EX

GroE Mix

5 x 2 ml Equivalents

 

幫助形成二硫鍵的添加物

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

GFK-PF005-0.5-EX

DsbC Set

500 µl Equivalents

GFK-PF005-10ML-EX

DsbC Set

5 x 2 ml Equivalents

GFK-PF006-0.5-EX

PDI Set

500 µl Equivalents

GFK-PF006-10ML-EX

PDI Set

5 x 2 ml Equivalents

 

 

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